Pengenalan Alat Pratikum Mikrobiologi

1.Erlenmeyer

Befungsi untuk tempat penumbuhan media bakteri serta dapat digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-bahan komposisi media.

2.Gelas Kimia

Berfungsi untuk menyimpan cairan, untuk preparasi media media, menampung akuades.  

                                                                                                 

3.Pipet Tetes

Berfungsi untuk memindahkan larutan, dengan volume 1 tetes larutan yang telah disepakati (1 tetes laruran = 0.05ml)

4.Pipet Mohr

Berfungsi untuk memindahkan larutan, bisa diketahui volumenya.

5.Bulp

Berfungsi untuk menyedot larutan yang dapat dipasang pada pangkal pipet ukur. Terbuat dari bahan karet yang resisten bahan kimia. Bulp memiliki 3 saluran yang masing-masing saluran memiliki katup. Katup yang bersimbol A (aspirate) berguna untuk mengeluarkan udara dari gelembung. S (suction) merupakan katup yang jika ditekan maka cairan dari ujung pipet akan tersedot ke atas. Kemudian katup E (exhaust) berfungsi untuk mengeluarkan cairan dari pipet ukur.

6.Bung-bung

Berfungsi sebagai wadah penyimpan pipet untuk menstrerilkan pipet.

7.Cawan Petri

Berfungsi untuk membiakkan (kultivasi) mikroorganisme. Medium dapat dituang ke cawan bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup.

8.Batang Pengaduk

Berfungsi uuntuk mengaduk cairan.

9.Batang Penyebar

Berfungssi unuk menyebarkan media.

10.OSE

Berfungsi untuk memindahkan bakteri.

]11.Tabung Reaksi

Berfungsi untuk uji-uji biokimiawi dan menumbuhkan mikroba.Tabung reaksi dapat diisi media padat maupun cair. Tutup tabung reaksi dapat berupa kapas, tutup metal, tutup plastik ata u aluminium foil.

12.Heimositometer

Berfungsi untuk penghitungan populasi bakteri.

13.Bunsen

Berfungsi untuk membakar dan bisa digunakan mensterilkan jarum ose dll. bagian api yang paling cocok untuk memijarkannya adalah bagian api yang berwarna biru (paling panas).

14.Object Glass

Berfungsi untuk membuat preparat atau menyimpan objek

15.Cover Glass

Berfungsi untuk mengunci posisi objek

16.Tip

Berfungsi wadah untuk memindahkan cairan yang bervolume kecil. Dan alat ini digunakan di Mikropipet.

17.Mikropipet

Berfungsi untuk memindahkan cairan yang bervolume cukup kecil, biasanya kurang dari 1000 µl. Banyak pilihan kapasitas dalam mikropipet, misalnya mikropipet yang dapat diatur volume pengambilannya (adjustable volume pipette) antara 1µl sampai 20 µl, atau mikropipet yang tidak bisa diatur volumenya, hanya tersedia satu pilihan volume (fixed volume pipette) misalnya mikropipet 5 µl.

Cara menggunakan Mikropipet :

1. Sebelum digunakan Thumb Knob sebaiknya ditekan berkali-kali untuk            memastikan lancarnya mikropipet.

2. Tip bersih dimasukkan ke dalam Nozzle / ujung mikropipet.

3. Thumb Knob ditekan sampai hambatan pertama / first stop, jangan menekan             lebih ke dalam lagi.

4. Tip ditekan ke dalam cairan sedalam 3-4 mm.

5. Tahan pipet dalam posisi vertikal kemudian lepaskan tekanan dari Thumb     Knob maka cairan akan masuk ke tip.

6. Ujung tip ditekan ke tempat penampung yang diinginkan.

7. Thumb Knob ditekan sampai hambatan kedua / second stop atau tekan           semaksimal mungkin maka semua cairan akan keluar dari ujung tip.

8.  Jika ingin melepas tip putar Thumb Knob searah jarum jam dan ditekan maka           tip akan terdorong keluar dengan sendirinya, atau menggunakan alat    tambahan yang berfungsi mendorong tip keluar.

18.Kulkas

Pada bidang mikrobiologi kulkas berfungsi untuk menyimpan biakan bakteri.

19.Centrifuge

                                                                                                           

Berfungsi untuk memisahkan natan dan supernatan.

20.Thermal Cycle

Berfungsi untuk memproses PCR. Cara menggunakan Thermal Cycler, yaitu :

-Pastikan alat sudah terhubung dengan aliran listrik

-.Alat dinyalakan selama 10 menit

-Block dibuka untuk menyimpan tabung mikro yang akan dianalisis

-Block ditutup

-Tombol menu dibuka

-Tentukan waktu runing yang sesuai dengan kebutuhan analisis

-Tombol enter ditekan

-Tombol run ditekan

-Tunggu sampai selesai

-Pilih tombol stop

-Kembali ke main menu

-Tombol off ditekan

-Setelah selesai block dibuka

-Tabung diambil

-Tabung disimpan di Freezer

-Alat dibereskan

21.Waterbath Shaker

Berfungsi untuk menginkubasi kultur cair. Cara kerja menggunakan waterbath shaker, yaitu :

-Pastikan alat sudah terhubung dengan aliran listrik

-Pastikan alat sudah diisi dengan aquadest dengan jumlah yang sesuai

-Tombol ON ditekan untuk menyalakan suhu inkubasi

-Tombol Set Suhu ditekan untuk menentukan suhu inkubasi

-Tombol ON ditekan apabila menggunakan shacker

-Tombol set ditekan untuk mengatur kecepatan

-Alat ditutup dengan baik

-Alat dibereskan dan dirapihkan

22.Timbangan Digital

Berfungsi untuk menimbang media.

23.Hot Plate

Berfungsi untuk memanaskan media

24.Laminar Air Flow

Berfungsi untuk inkubasi dan penuangan bakteri. Cara menggunakan Laminar Air Flow, yaitu :

-Pastikan alat sudah terhubung dengan aliran listrik

-Pintu bagian bawah dibuka

-Seka dengan alkohol

-Pintu bagian bawah ditutup

-Tombol lampu UV dinyalakan selama 15 menit dan jangan dibuka

-Setelah 15 menit lampu UV dimatikan

-Tombol lampu dan tombol udara dinyalakan

-Alat sudah bisa digunakan

-Bereskan alat yang sudah dipakai

25.Autoclave

Berfungsi sebagai alat untuk proses sterilisasi alat dan media. Cara kerja autoclave       :

-Pastikan kabel sudah tersambung dengan alat listrik

-Pastikan autoclave sudah terisi dengan Aquadest (bisa dilihat dalam tabung water level)

-Media dan alat yang akan di sterilisasi dimasukan

-Tutup dengan penutup alat

-Penutup alat dikencangkan dengan memutar kemudi kearah jarum jam

-Pastikan klep/kantup udara mengarah horizontal

-Tombol ON (2 buah) dinyalakan

-Tombol power (3 buah tergantung daya listrik) dinyalakan

-Tunggu sampai suhu jarum mencapai 121⁰C

-Setelah mencapai suhu yang dimaksud tombol power dimatikan

-Tombol timer waktu diputar ke angka 15 atau 20 menit

-Tunggu sampai proses sterilisasi selesai matikan alat

-Setelah jarum tekanan menunjukan angka  nol, tutup udahra dibuka hingga mengarah vertical

-Tutup Autoclave dibuka dan biarkan uap panasnya menghilang

-Media dan alat siap pakai

26.Mikroskop

Berfungsi sebagai alat untuk melihat objek yang terlalu kecil atau mikroskopik. Berikut ini merupakan gambar mikroskop beserta bagian-bagiannya,

Read More

LAPORAN ISOLASI BAKTERI DAN FUNGSI LINGKUNGAN AKUATIK

I. PENDAHULUAN

1.1         Latar belakang

Mikroba yang ditemukan di suatu lingkungan ditemukan dalam populasi campuran, sangat jarang sekali yang ditemukan sebagai satu spesies tunggal. Penelitian mengenai mikroorganisme biasanya memerlukan teknik untuk memisahkan populasi campuran pada permulaanya, atau biakan campuran, menjadi spesies-spesies yang berbeda-beda sebagai biakan murni. Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang berasal dari satu sel induk (Prescott, 2003).

Biakan murni diperlukan karena semua metode mikrobiologis yang digunakan dalam menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Ada dua teknik yang sering digunakan untuk memperoleh biakan murni, yaitu cawan gores dan cawan tuang. Namun yang digunakan dalam praktikum ini adalah teknik cawan gores dengan metode kuadaran.

Sifat hidup bakteri secara umum adalah sapotrofik pada sisa buangan hewan ataupun tanaman yang sudah mati, tetapi banyak juga parasitik pada hewan, manusia, dan tanaman dengan menyebabkan banyak penyakit (Suriawiria 2008). Menurut Waluyo (2007), pengamatan bekteri dapat dilakukan secara individual, satu per satu, maupun secara kelompok dalam bentuk koloni. Bila bakteri yang ditumbuhkan di dalam medium yang tidak cair, maka akan terjadi suatu kelompok yang dinamakan koloni. Bentuk koloni berbeda-beda untuk setiap spesies, dan bentuk tersebut merupakan ciri khas bagi suatu spesies tertentu.

Fungi atau cendawan adalah organisme heterotrofik, yang memerlukan senyawa organik untuk nutrisinya. Bila fungi hidup dari benda organik mati yang terlarut disebut saprofit. Saprofit menghancurkan sisa-sisa tumbuhan dan hewan yang kompleks, menguraikannya menjadi zat-zat kimia yang lebih sederhana, yang kemudian dikembalikan ke dalam tanah. Hal ini dapat meningkatkan kesuburan tanah, fungi juga penting dalam pembuatan antibiotik seperti Peniciline. Akan tetapi fungi juga dapat merugikan jika membusukkan kayu, tekstil, makanan dan bahan-bahan lain (Pelczar dan Chan 2007).

1.2         Tujuan

Tujuan dari praktikum ini adalah mempelajari cara mengisolasi bakteri dari lingkungan akuatik dengan metode penggoresan kuadran serta mengamati ciri-ciri koloni bakteri yang tumbuh.

II.      METODE KERJA

2.1         Waktu dan Tempat

Praktikum dilaksanakan pada Selasa, 28 Februari 2012 pukul 11.50 s.d. 13.30 WIB, bertempat di Laboratorium CB Mikrobiologi, kampus Cilibende - Diploma Institut Pertanian Bogor.

2.2         Alat dan Bahan

Alat yang digunakan adalah cawan petri, jarum OSE, bunsen, korek api, oppendorf, dan spidol. Bahan yang digunakan adalah media NA, alkohol, dan sampel air.

2.3         Prosedur Kerja

2.3.1 Isolasi Bakteri

Alat dan bahan yang akan digunakan disiapkan, lalu nama dan kelompok ditulis dalam label dan ditempelkan pada tutup cawan petri. Lalu tangan disemprotkan alkohol agar steril. Cawan petri (kaca penyebar) pada bagian dasar dibagi zonasi dengan spidol menjadi kuadran 0, I, II, III dengan posisi :

Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Pinggiran cawan petri yang berisi media NA dipanaskan, agar steril. Setelah itu jarum OSE dibakar di atas api bunsen hingga berwarna merah terbakar, lewatkan sampai dekat gagang, lalu jauhkan dari api hingga dingin. Oppendorf yang berisi sampel air dibuka dan jarum OSE yang telah didinginkan dicelupkan ke dalam air sampel.

Cawan petri yang berisi media NA di gores, gores permukaan kuadran 0 terlebih dahulu. Jarum OSE dipanaskan kembali, setelah dingin cawan petri dibuka pelan-pelan dan goresan di ujung kuadran 0 disambung ke kuadran I. Kemudian jarum OSE dipanaskan kembali, setelah dingin cawan petri dibuka pelan-pelan dan goresan di ujung kuadran I disambung ke kuadran II. Setelah itu jarum OSE dipanaskan kembali, setelah dingin cawan petri dibuka pelan-pelan dan goresan di ujung kuadran II disambung ke kuadran III.

Kemudian pinggiran cawan dipanaskan kembali dan jarum OSE dipijarkan agar bakterinya mati. Setelah itu, cawan petri dimasukkan ke kantong plastik dan di simpan selama 24 jam untuk diteliti.

2.3.2 Isolasi Fungi

Pada Ikan Sakit

Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Pinggiran cawan petri yang berisi media NA dipanaskan, agar steril. Ambil sample ikan sakit, dan taruh di media NA yang terdapat di cawan petri. Kemudian ratakan dengan batang pengaduk.

Pada  Air Kolam Induk

Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Pinggiran cawan petri yang berisi media NA dipanaskan, agar steril. Setelah itu jarum OSE dibakar di atas api bunsen hingga berwarna merah terbakar, lewatkan sampai dekat gagang, lalu jauhkan dari api hingga dingin. Oppendorf yang berisi air kolam indukan dibuka dan jarum OSE yang telah didinginkan dicelupkan ke dalam air kolam indukan. Kemudian gores secara zig-zag di cawan petri yang terdapat media NA.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1       Hasil

Tabel 1. Hasil pengamatan isolasi bakteri

Sampel	Nama	Bentuk	Tepian	Elevasi	Ciri-ciri
Air Tandon	Dedy Hidayat				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu
	Fega Iken				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu
	Himmah Ihya				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu
	Syahril Ritonga				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu
	Syuhada Restu				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu
	Tiara Analia				Bentuknya bulat, tepiannya licin, elevasinya cembung, warnanya putih susu

Tabel 2. Hasil pengamatan isolasi fungi

Sampel	Nama	Hasil
Ikan sakit	Syahril Ritonga	+
	Dedy Hdayat	+
Air Kolam Induk	Syuhada Restu & Tiara	+
	Fega & Himmah	+

Keterangan:     + = tumbuh hifa

                        - = tidak tumbuh hifa

3.2     Pembahasan

          Teknik isolasi meliputi mendapatkan, memurnikan, identifikasi, dan pengujian produksi (Hidayat, Padaga, Suhartini 2006). Menurut Hadioetomo (1993), untuk mencirikan dan mengidentifikasi suatu spesies mikroorganisme tertentu, pertama-tama organisme tersebut harus dapat dipisahkan dari mikroorganisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, lalu ditumbuhkan menjadi biakan murni.

            Dalam pengisolasian diterapkan beberapa teknik, diantaranya teknik cawan gores dan cawan tuang. Kedua teknik tersebut didasarkan pada prinsip yang sama yaitu mengencerkan organisme sedemikian rupa sehingga suatu spesies organisme dapat dipisahkan dari organisme lainnya, dengan angggapan bahwa koloni tunggal yang terpisah dan nampak dicawan petri setelah diinkubasi berasal dari satu sel tunggal (Widanarni 2011).

Pada praktikum kali ini pengisolasian dilakukan dengan teknik cawan gores dan menggunakan metode kuadran, yaitu membuat cawan terbagi menjadi kuadran-kuadran. Metode ini mempunyai dua keuntungan, yaitu menghemat bahan dan waktu. Namun untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan yang lumayan yang biasanya diperoleh dari pengalaman. Metode cawan gores yang dilakukan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan.

Goresan yang terpenting untuk diamati adalah goresan terakhir, karena dari goresan terakhir itu didapatkan koloni dari sel tunggal yang benar-benar murni tidak tercampur spesies lain, sehingga mudah untuk dipindahkan ke media steril lain yang berfungsi sebagai media biakan murni sel tunggal yang diperoleh.

Media agar merupakan substrat yang sangat baik untuk memisahkan campuran mikroorganisme sehingga masing-masing jenisnya menjadi terpisah-pisah. Teknik yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme pada media agar memungkinkannya tumbuh agak berjauhan dari sesamanya, juga memungkinkan setiap selnya berhimpun membentuk koloni, yaitu sekelompok massa sel yang dapat dilihat dengan mata telanjang. Bahan yang diinokulasikan pada medium disebut inokulum, dengan menginokulasi medium NA dengan metode cawan gores atau media cawan tuang, sel-sel mikroorganisme akan terpisah sendiri-sendiri.

Banyak bakteri yang dapat menyebabkan ikan terserang penyakit, diantaranya yaitu :

1.      Vitiligo. Dapat dikenali dengan adanya noda putih berkabut pada sirip atau kulit ikan. Selaput lendir terbuka sehingga daerah tak bersisik menjadi kelihatan. Hal ini bisa menyebabkan kulit ikan akan hancur atau terkelupas.

2.      Fin Rot. Bakteri ini akan menyerang ikan yang tidak sehat, ikan yang mengalami stress atau kelebihan populasi dalam sebuah aquarium Ekor ikan yang terserang akan membusuk pada ujungnya dan menyebar terus sampai ke pangkal ekor.

3.      Bacterial Gill Rot. Timbul ketika selaput lendir sensitif pada insang telah diserang parasit. Bagian dalam insang yang telah mati diserang bakteri berwarna putih keabu-abuan.

4.      Columnaris. Ditandai dengan adanya seperti jaringan halus berwarna putih pada mulut, sirip, ekor dan sisik ikan.Pada tahap selanjutnya pada ekor dan sirip kadang-kadang mengalami pembusukan

5.      Bloody inflammations. Pendarahan pada sebagian area pada kulit ikan, pendarahan pada anus dan ekor dan sirip merupakan ciri-ciri infeksi yang terjadi.

6.      Dropsy. Bakteri ini menginfeksi usus ikan sehingga ikan malas untuk makan karena adanya gangguan di pencernaan.Pada tahap selanjutnya selaput pada usus akan lepas menempel pada anus berwarna putih dan panjang seperti berak putih. Sehingga makanan tidak dapat lagi dicerna karena organ didalam sudah tidak dapat bekerja dengan baik.Pada tahap akhir karena kerusakan organ hati ikan atau kerusakan organ urin. Akhirnya cairan berkumpul di rongga pada tubuh ikan, pada bagian dalam sisik atau pada mata ikan. Hal ini menyebabkan bengkak pada sisik dan pada mata ikan

7.      Erythrodermatitis. Penyakit ini terlihat dari mulai adanya noda merah pada kulit yang akan berubah menjadi borok atau luka berdarah yang terbuka. Pada tahapan lanjut tepian luka atau borok tersebut akan berwarna putih, dan biasanya terjadi pada punggung (bagian atas) dan bagian tubuh ekor.

Dari hasil pengamatan diperoleh hasil bahwa koloni yang tumbuh di media memiliki warna putih susu, bentuknya bulat, tepiannya licin, dan elevasinya cembung. Hasil goresan akhir pada cawan petri menghasilkan satu koloni, karena setiap koloni merupakan biakan murni satu macam mikroorganisme (Pelczar dan Chan 2007).

Berikut hasil dari percobaan :

 

Gambar 1 Isolasi bakteri

Gambar 2 Isolasi fungi pada air kolam induk

Gambar 3 Isolasi fungi pada ikan sakit

 

IV.       KESIMPULAN DAN SARAN

3.1         Kesimpulan

Menggunakan teknik cawan gores dengan metode kuadran memeilik keunggulan, yaitu menghemat bahan dan waktu. Goresan yang terpenting untuk diamati adalah goresan terakhir, karena dari goresan terakhir itu didapatkan koloni dari sel tunggal yang benar-benar murni.

Teknik cawan gores dengan metode kuadran bisa mendapatkan biakan murni, terbukti dengan seragamnya ciri-ciri bakteri yang diperoleh.

3.2         Saran

Untuk praktikum kedepannya, diharapkan agar metode pengisolasian yang lainnya seperti metode cawan tuang pun dipraktikkan dan media yang dipakai pun seharusnya lebih beragam. Hal ini dimaksudkan agar mahasiswa memiliki bekal yang lebih mahir dalam melakukan pengisolasian dengan berbagai teknik dan jenis media yang beranekaragam.

DAFTAR PUSTAKA

Prescott, L.M. 2003. Microbiology 5^th edition. New York: Mc Graw Hill.

Suriawiria, Unus. 2008. Mikrobiologi Air. Bandung: PT. Alumni.

Waluyo, Lud. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press.

Pelczar, M. J., Chan, E.C.S. 2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Volume 1.

Hidayat, Nur. Masdiana C. Padaga, Sri Suhartini. 2006. Mikrobiologi Industri.

Yogyakarta: Andi Offset.

Hadioetomo RS.1993. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek: Teknik dan Prosedur

Dasar Laboratorium. Jakarta: Gramedia Utama.

Widanarni. 2011. Modul Praktikum Mikrobiologi Akuatik. Bogor: Institut

Pertanian Bogor.

Nuryaman, Asep. 2010. http://www.liliaquarium.com/penyakit-pada-ikan-cacing-   virus-bakteri&catid=34:profil. 04-03-2012.

Read More